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     1.項目來源及背景： 來源：上海衛生和計劃生育委員會 背景：PLK 1 沉默對胃癌的影響已有很多證據和研究，而胃癌的發生多在老年人，此類病人的葉酸水平偏低，PLK 1 沉默在葉酸缺乏的情況下，其效率和作用如何？尚未有文獻報道。我們在實驗中發現：胃癌細胞株SGC-7901、BGC-823 、 N87和胃粘膜細胞株HFI-145在轉染PLK 1 特異 siRNA后，PLK 1 mRNA 和蛋白表達均減少。對于胃癌細胞株，PLK 1 siRNA導致其細胞增生抑制、G2M期阻滯和凋亡增加，葉酸缺乏可以增加此作用，對于胃粘膜細胞株HFI-145，則沒有發現此效應。葉酸受體 α （FR-α） 在當成腫瘤標志物和腫瘤治療靶點上是大有可為的，是一個潛在的腫瘤標志物。亞甲基四氫葉酸還原酶（methylenete-trahydrofolate reductase，MTHFR）是葉酸提供一碳單位時所需要的關鍵酶.近年來，關于MTHFR多態性與腫瘤關系的研究較多，目前已發現其與結、直腸癌和急性淋巴細胞白血病等多種的發生有密切的聯系.基因芯片在腫瘤新基因的篩選、基因組學的研究、腫瘤亞型分類、腫瘤基因診斷、藥物篩選等幾個方面有重要作用 2.研究目的及意義： 本課題研究的總目標是確定PLK 1 siRNA、葉酸缺乏及其聯合后對胃癌細胞的FR-α表達、MTHFR多態性和腫瘤基因的影響，以及在葉酸缺乏環境得以糾正后，上述影響可否消失。若能證明PLK 1 siRNA和葉酸缺乏是有效的治療手段，對胃癌病人將是一大福音，腫瘤基因的變化的測定，對胃癌治療策略的指定和藥物的選擇均有重大意義。 3.技術原理及性能指標： （1）完成PLK 1 siRNA對胃癌細胞株SGC-7901、BGC-823、 N87和胃粘膜細胞株GES-1的 FR-α表達的影響。 主要技術性能指標：PLK 1 siRNA干擾后，各組細胞的FR-α表達有不同程度的抑制作用，與對照組相比較，** p<0.01，*** p<0.001。 （2）觀察了葉酸缺乏時，對胃癌細胞株SGC-7901、BGC-823、N87和胃粘膜細胞株GES-1的 FR-α表達的影響。 主要技術性能指標：將細胞處于葉酸缺乏的培養基中培養一周后，各胃癌細胞的FR-α表達有不同程度的顯著的表達作用，與對照組相比較，* p<0.05，** p<0.01。 （3）PLK 1 siRNA和葉酸缺乏聯合對胃癌細胞株SGC-7901、BGC-823、 N87和胃粘膜細胞株GES-1的 FR-α表達的影響。 主要技術性能指標：PLK 1 siRNA干擾后和葉酸缺乏聯合，胃癌細胞SGC-7901、N87、GES-1的FR-α表達有不同程度的抑制作用，與對照組相比較，* p<0.05，** p<0.01，*** p<0.001。而BGC-823與對照組相比，未顯出差異。 （4） 研究觀察了葉酸缺乏環境恢復正常后，PLK 1 siRNA和葉酸缺乏聯合組細胞的FR-α表達變化。 主要技術性能指標：PLK 1 siRNA干擾和葉酸缺乏環境恢復正常后，各胃癌細胞的FR-α表達有不同程度的抑制作用，與對照組相比較，** p<0.01，*** p<0.001。 （5）胃癌細胞株SGC-7901、BGC-823 、 N87和胃粘膜細胞株GES-1、MKN45 MTHFR多態性的差別（MTHFR alpha的 677（C→T）和1298（A→C）兩個位點的多態性）。 主要技術性能指標：在MTHFR基因的667位點除NCI-N87沒有突變，GES-1、BGC-823、7901、MKN45均由C突變成T。而在1298位點，這幾株細胞均為有基因的突變。 （6） PLK 1 siRNA對胃癌細胞株SGC-7901、BGC-823、N87和胃粘膜細胞株GES-1腫瘤基因BCL-2和P53表達的影響。 主要技術性能指標：PLK 1 siRNA干擾后，各胃癌細胞的BCL-2表達有不同程度的抑制作用，與對照組相比較，** p<0.01，*** p<0.001。P53表達均明顯增加，* p<0.05，** p<0.01。 （7） 研究了葉酸缺乏對胃癌細胞株SGC-7901、BGC-823、N87和胃粘膜細胞株GES-1的MTHFR腫瘤基因BCL-2和P53表達的影響。 主要技術性能指標：將細胞處于葉酸缺乏的培養基中培養一周后，各胃癌細胞的BCL-2表達有不同程度增加作用，但與對照組相比較，未顯出統計學差異。P53表達與對照組相比較，未顯出統計學差異。 （8） PLK 1 siRNA和葉酸缺乏聯合對胃癌細胞株SGC-7901、BGC-823、 N87和胃粘膜細胞株GES-1腫瘤基因BCL-2和P53表達的影響。 主要技術性能指標：PLK 1 siRNA干擾后和葉酸缺乏聯合，胃癌細胞SGC-7901、BGC-823、N87、GES-1的BCL-2表達有不同程度的抑制作用，與對照組相比較，* p<0.05，** p<0.01，*** p<0.001。GES-1、BGC-823的P53表達與對照組相比較，** p<0.01 （9）研究了葉酸缺乏環境恢復正常3天后，PLK 1 siRNA和葉酸缺乏聯合組細胞的腫瘤基因BCL-2和P53表達的變化。 主要技術性能指標：PLK 1 siRNA干擾后和葉酸缺乏環境恢復正常3天后，胃癌細胞SGC-7901、BGC-823、N87、GES-1的BCL-2表達有不同程度的抑制作用，與對照組相比較，* p<0.05，** p<0.01。 4.社會經濟效益： 本研究，初步能證明PLK 1 siRNA和葉酸缺乏是有效的治療手段，對胃癌病人將是一大福音，腫瘤基因的變化的測定，對胃癌治療策略的指定和藥物的選擇均有重大意義。.