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     1.項(xiàng)目來源及背景： 來源：上海衛(wèi)生和計(jì)劃生育委員會 背景：正常情況下，在腫瘤形成前機(jī)體免疫系統(tǒng)可通過細(xì)胞免疫特異性殺滅引發(fā)腫瘤的突變細(xì)胞。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和術(shù)后局部復(fù)發(fā)、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移與機(jī)體免疫功能低下、腫瘤細(xì)胞逃逸了機(jī)體的免疫監(jiān)控有重要關(guān)系。隨著腫瘤免疫學(xué)研究的不斷深入發(fā)展，近年來國內(nèi)外眾多學(xué)者除繼續(xù)深入研究機(jī)體外周血細(xì)胞免疫功能狀況外，更注重于研究惡性腫瘤微環(huán)境中細(xì)胞免疫功能狀況。近期文獻(xiàn)報道，在對腎癌、肝癌、胃癌、乳腺癌、結(jié)直腸癌等腫瘤微環(huán)境細(xì)胞免疫功能狀況的研究中發(fā)現(xiàn)，調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell，Treg）起著重要的細(xì)胞免疫抑制作用，并與患者預(yù)后有關(guān)〔1-4〕。Treg細(xì)胞是一類具有免疫抑制作用的T細(xì)胞，其可抑制一些免疫細(xì)胞發(fā)揮功能，使腫瘤細(xì)胞發(fā)生免疫逃逸，但被抑制的免疫細(xì)胞類型、數(shù)量及與患者的預(yù)后關(guān)系文獻(xiàn)報道并不一致。Sagaguchi S等認(rèn)為，Treg細(xì)胞可抑制CD4、CD8 T細(xì)胞及樹突狀細(xì)胞（DC）的功能，對NK細(xì)胞及NKT細(xì)胞的抑制作用不明確〔5〕。而Shevach EM則認(rèn)為，Treg細(xì)胞對CD4、CD8 T細(xì)胞、DC、NK細(xì)胞及NK T細(xì)胞功能均可抑制〔6〕。多數(shù)研究認(rèn)為腫瘤內(nèi)Treg細(xì)胞的浸潤數(shù)量與患者預(yù)后呈負(fù)相關(guān)〔2-4，7〕；但也有認(rèn)為二者不相關(guān)的研究報道〔8〕。因此有關(guān)此方面的研究國內(nèi)外學(xué)者均在深入進(jìn)行中。 2.研究目的及意義： 本課題應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法檢測胃癌患者腫瘤、瘤旁、正常胃壁組織及前哨淋巴結(jié)中Treg細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞密度，位置及功能狀況，分析Treg細(xì)胞與多種免疫細(xì)胞間的關(guān)系及其與患者臨床病理和預(yù)后的關(guān)系，為進(jìn)一步研究免疫干預(yù)治療預(yù)防胃癌根治術(shù)后局部復(fù)發(fā)和/或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的提供理論基礎(chǔ)。 3.技術(shù)原理及性能指標(biāo)： 采用免疫組織化學(xué)方法檢測200例胃癌患者腫瘤、瘤旁1cm 、瘤旁7- 8cm （正常胃壁組織）及前哨淋巴結(jié)中Treg細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞密度、位置及功能狀況，分析Treg細(xì)胞與多種免疫細(xì)胞間的關(guān)系及其與患者臨床病理和預(yù)后的關(guān)系。 一 病例選擇 1.經(jīng)病理證實(shí)的首次胃癌根治術(shù)患者。 2.患者術(shù)前未進(jìn)行過化療、放療、生物及免疫治療等。 3.患者以往無其他惡性腫瘤病史。 4.患者無自身免疫性疾病病史。 二 標(biāo)本采集和制作 1.開腹后先作前哨淋巴結(jié)定位，立即切取1-3個前哨淋巴結(jié)于10%中性福爾馬林中固定。 2.腫瘤標(biāo)本離體后即切取中心無壞死處腫瘤組織、瘤旁1cm及瘤旁7-8cm腸組織各一塊于10%中性福爾馬林中固定。 3.將采集的標(biāo)本作常規(guī)組織處理、石蠟包埋、行5um組織切片，備作免疫細(xì)胞檢測。 4.腫瘤標(biāo)本及轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)均作常規(guī)病理檢查及免疫組化檢查。 三 免疫細(xì)胞檢測 1.采用免疫組織化學(xué)方法（免疫細(xì)胞檢測試劑盒）檢測200例胃癌患者腫瘤、瘤旁1cm 、瘤旁7-8cm （正常胃壁組織）及前哨淋巴結(jié)中Treg細(xì)胞和CD3、CD4、CD8、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞密度、位置及功能狀況。結(jié)果判定：在400倍高倍顯微鏡下觀察并計(jì)數(shù)陽性細(xì)胞（細(xì)胞膜或細(xì)胞核呈紅色 或棕色顆粒者為陽性細(xì)胞）。 2.采用TUNEL試劑盒檢測200例胃癌患者腫瘤、瘤旁1cm 、瘤旁7-8cm （正常胃壁組織）及前哨淋巴結(jié)中Treg細(xì)胞和CD3、CD4、CD8、B細(xì)胞、NK細(xì)胞等多種免疫細(xì)胞凋亡狀況。 四 患者臨床資料收集及隨訪 1.收集患者臨床病理資料：包括年齡、性別、腫瘤部位、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況、腫瘤分化程度、組織學(xué)分型、臨床病理分期等。 2.患者隨訪：包括定期檢測血清CEA等腫瘤相關(guān)指標(biāo)、胸部X線、肝臟B超或CT、胃鏡等檢查，觀察腫瘤術(shù)后局部復(fù)發(fā)和/或轉(zhuǎn)移情況等。 五 結(jié)果分析 完成對上海交通大學(xué)附屬新華醫(yī)院崇明分院普外科2007年1月-2008年12月胃癌手術(shù)患者，共200例采用免疫組織化學(xué)方法檢測200例胃癌患者腫瘤、瘤旁1cm 、瘤旁7- 8cm （正常胃壁組織）及前哨淋巴結(jié)中Treg細(xì)胞和多種免疫細(xì)胞密度、位置及功能狀況，利用均值分組，采用t檢驗(yàn)，卡方檢驗(yàn)，Cox生存分析等統(tǒng)計(jì)學(xué)方法，了解Treg細(xì)胞與多種免疫細(xì)胞間的關(guān)系及其與患者臨床病理和預(yù)后的關(guān)系。 4.社會經(jīng)濟(jì)效益： 1）可為加強(qiáng)胃癌根治術(shù)后病人免疫治療，預(yù)防術(shù)后局部復(fù)發(fā)和/或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供理論依據(jù)。 2）可為進(jìn)一步研究免疫干預(yù)治療預(yù)防胃癌根治術(shù)后局部復(fù)發(fā)和/或遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移提供理論基礎(chǔ)。 人才培養(yǎng)情況 1）通過本課題研究可提高上海交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院附屬新華醫(yī)院崇明分院眾多外科醫(yī)師參與科研的積極性。 2）通過本課題研究可提升科室3名中青年醫(yī)師的科研能力。