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     一、課題來源與背景 本課題來源于吉林省衛生和計劃生育委員會科研計劃項目，項目編號為2011Z022，經費為2萬元。我們從臨床證侯學研究中發現“先天伏寒“證并不等于腎陽虛，課題組初步探索了先天伏寒的微觀生物學指標，推測“先天伏寒“證候的亞健康人群具有潛在性炎癥紊亂和HPA軸功能低下。hs-CRP、ACTH、皮質醇紊亂可能為其證候特征的一部分。在HPA軸激素的改變方面，“先天伏寒“證候證較陽虛證患者的HPA軸功能更為低下，而hs-CRP水平上升更為明顯。故此我們推測“先天伏寒”證候的動物模型可能會有上述表現。目前在動物實驗中，“先天伏寒”動物模型研究尚屬空白，因此我們根據“母為基，父為楯”之理 及“男女媾精，陽氣不足，寒伏于內”的假說推導，結合先天伏寒病因假說及成熟的腎陽虛模型，選擇三種目前比較公認的腎陽虛動物造模方法制造出陽虛動物，篩選出比較有代表性的陽虛動物模型，然后根據雌雄陽虛的不同進行交配，對繁殖的子一代、子二代、子三代進行行為學觀察、血清生化指標及基因組學研究，尋找出共同的生理特性，同時由于中醫講究“理-法-方-藥”的一致性，在相應模型身上進行藥效驗證與再評價，從以方測證角度進一步評價模型成功與否。從而為臨床開展“先天伏寒”治療提供實驗基礎。 二、技術原理與性能指標 本課題自立題以來，在課題負責人的統籌安排下，課題組成員進行了大量的文獻檢索工作和實驗研究，制造出符合“先天伏寒”證型的動物模型，為臨床開展“先天伏寒”治療提供了實驗基礎。 研究內容一： 腎陽虛動物模型的實驗研究 通過復合因素造模方法復制腎陽虛小鼠模型。選取4周齡Wistar小鼠50只，設立腎陽虛模型組及正常對照組，腎陽虛模型組給予氫化可的松腹腔注射，連續14天，同時附加寒冷因素（冷水中游泳）；正常對照組常規喂養。造模完成后對腎陽虛模型組及正常對照組的一般狀態表現及血清免疫因子（hs-CRP、TNF-α、IL-6、Th亞群）水平進行評價。同時檢測腎陽虛模型鼠及空白對照組的血清Cortisol，ACTH，T3，T4，TSH的含量。 研究內容二： 先天伏寒動物模型的實驗研究 本研究利用先天伏寒證的病因病機理論來復制先天伏寒動物模型。使腎陽虛模型小鼠同籠產子，得到先天伏寒動物模型。設立先天伏寒模型組、腎陽虛模型組。對模型小鼠一般狀態表現、口腔前后爪溫度及免疫相關因子（hs-CRP、TNF-α、IL-6、Th亞群）水平進行評價；檢測小鼠HPA軸相關指標，包括Cortisol、ACTH、T3、T4、TSH。 研究內容三： 伏寒顆粒對先天伏寒模型小鼠免疫相關因子水平、神經內分泌系統的影響 將已成模的先天伏寒模型小鼠用摸球法平均分成伏寒顆粒組，腎氣丸組，空白對照組，分別給予伏寒顆粒、腎氣丸及蒸餾水灌胃14天并對各項指標進行監測。 技術關鍵：實驗過程中制出成熟穩定的“先天伏寒”動物模型是將中醫臨床病癥引渡到實驗室研究的關鍵點和必備條件，首先制出腎陽虛（現在其模型的制造比較成熟），再將腎陽虛的模型小鼠同籠產子，得到先天伏寒動物模型。 三、技術的創造性與先進性 1.從中醫病因病機角度出發，結合中醫證候構建“先天伏寒”證候動物模型。 2.“先天伏寒”證候模型的制備成功，將為深入探尋“先天伏寒”病因致病機理開拓新的視野和思路。 四、技術的成熟程度，適用范圍和安全性 通過本研究制備出腎陽虛模型，在此基礎上附加寒冷因素并繁育子代構建“先天伏寒”證候動物模型。檢測“伏寒”動物模型的血漿皮質醇、促腎上腺皮質激素，T3，T4，TSH的含量，完成檢測炎癥因子IL-2、IL-6、TNF-α、hs-CRP水平。完成以藥測證反證“伏寒”動物模型的實驗。并得出結論，完成論文2篇。 中醫證候動物模型是根據傳統中醫學理論及中醫證候的現代研究成果，對人體疾病的某些“證”進行模擬復制，創造出的用于進一步探討中醫“證”的實質的實驗動物。中醫證候動物模型是中醫藥實驗室研究的基礎，對中醫證候動物模型的研究是中醫藥進一步發展的必經之路，因此如何建立理想的中醫證候動物模型是目前中醫藥研究者面臨的重要問題。先天伏寒證是中醫證候體系的重要組成部分，但因為臨床上病人從先天不足、伏寒于內到臨床發病，可能需要幾十年的時間，所以目前深入研究“先天伏寒”致病的微觀機理有一定難度，鑒于此，本實驗研究以先天伏寒病因學說為理論依據，通過制備腎陽虛模型為基礎，使其交配產子，得到先天伏寒動物模型，并對腎陽虛模型及先天伏寒模型免疫相關因子進行評價。從而為臨床開展“先天伏寒”治療提供實驗基礎。 五、應用情況及存在的問題 實驗研究的時間相對較短，未能更完整的觀測到更詳細全面的指標和先天伏寒模型小鼠組織形態學上的演變特點。怎樣進一步完善先天伏寒動物模型的復制和評價是我們今后努力的方向之一，先天伏寒證的發生發展是一個大量分子直接或間接參與，十分復雜的過程，對于伏寒顆粒更準確、更精細的機制尚又有待進一步深入研究。